SARS-CoV-2 nukleiinhappe testikomplekt

Kasutusotstarve:

SARS-CoV-2 nukleiinhappe testikomplekti rakendatakse COVID-19 nukleiinhappe kvalitatiivsele avastamisele ninaneelu tampoonides, orofarüngeaalsetes tampoonides ja rögas. Testi tulemused annavad molekulaardiagnoosi aluse infektsioonile või kahtlustatavatele patsientidele ning neid ei tohiks kasutada kliinilise diagnoosi ainsa kriteeriumina.

Materjalid:

Testi protseduur:

A. Proovi ettevalmistamine

Ekstraheeritud RNA on SARS-CoV-2 nukleiinhappe testkomplekti lähtematerjal.

Oluline: Iga nukleiinhappe ekstraheerimise protseduur tuleb läbi viia samaaegselt ühe positiivse kontrolliga (40 μL, lahjendada steriilsete soolalahuste/PBS-iga soovitud mahuni) ja ühe negatiivse kontrolliga (40 μL, lahjendada steriilsete soolalahustega/PBS soovitud mahuni).

Soovitatav on kasutada järgmisi kaubanduslikke nukleiinhappe ekstraheerimise komplekte: PureLinkTM Viral RNA/DNA Mini Kit (Invitrogen); Viiruslik RNA Mini komplekt (QIAGEN); TIANamp Hi-DNA/RNA Kit (TIANGEN);

B. Reaktsioonisegu häälestus

1. Kõik reaktiivid ja proovid tuleb enne kasutamist täielikult sulatada, täielikult segada ja tsentrifuugida lühidalt toatemperatuuril (ligikaudne vahemik 18–25 °C).

2. Valmistage reaktsioonisegu vajalik maht sobiva suurusega polüpropüleenist mikrotsentrifuugitorus.

3. Pipett 25 μL reaktsiooni segatakse igasse vajalikku kaevu sobiva optilise 96-kaevu reaktsiooniplaadi või sobiva optilise reaktsioonitoruga.

C. Malli lisamine

1. Lisage proovidest 5 μL ekstraheeritud RNA-d / positiivne kontroll / negatiivne kontroll. Kogumaht on 30 μL.

2. Segage proovid ja juhtseadised põhjalikult reaktsiooniseguga, torustikuga üles ja alla/Vortexi.

3. Sulgege 96-kaevuline reaktsiooniplaat sobivate kaanede või optilise kleepkilega ja reaktsioonitorud sobivate kaanedega.

4. Tsentrifuuge 96-kaevuline reaktsiooniplaat tsentrifuugis mikrotiiterplaadi rootoriga 30 sekundit umbes 2500rpm juures.

D. Reaalajas PCR-instrumendi programmeerimine

Põhiteavet erinevate reaalajas PCR-instrumentide seadistamise ja programmeerimise kohta leiate vastava instrumendi kasutusjuhendist. Analüüs on optimeeritud ABI7500 reaalajas PCR-süsteemi jaoks. PCR-jooks toimub jalgrattasõidu tingimustega, nagu on kirjeldatud allolevas tabelis.

Määratlege fluorestsentsdetektorid

*Palun seadke instrumendi fluorestsents-siseviiteks "Puudub", näiteks: ABI seeria instrumentide puhul seadke "Passiivne viide" väärtusele "Puudub".

E. Andmeanalüüs

Palun määrake analüüsi parameetrid ja analüüsige andmeid vastavalt asjakohaste instrumentide kasutusjuhenditele.

Võtame näiteks ABI 7500:

Lähtealus tuleks seada vahemikku, mis kõrvaldab võimendustsüklites leitud tausta fluorestsentsi, kuid mis ei kattu piirkonnaga, kus võimendussignaalid tõusevad taustast kõrgemale (Algusväärtus:3 ~ 10; Lõppväärtus: 10-20). Tsükli lävi (Ct) peaks olema eksponentsiaalse faasi põhjas. Analüüsi tulemuse automaatseks saamiseks klõpsake nuppu "Analüüs" ja lugege tuvastustulemust aknas "Aruanne".